AMPPD為1,2-二氧環(huán)已烷衍生物,它是一種生物化學領域中最新的超靈敏的堿性磷酸酶底物,其特點:反應速度快,在很短時間內(nèi)提供正確可靠的結(jié)果。在它的分子結(jié)構(gòu)中有兩個重要部分,一個是聯(lián)接苯環(huán)和金剛烷的二氧四節(jié)環(huán),它可以斷裂并發(fā)射光子;另一個是磷酸根基團,它維持著整個分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。在通常情況下,這種化合物很穩(wěn)定。但是,結(jié)果有堿性磷酸酶存在,DioxetanePhosphate作為酶的底物會在酶的催化一脫去磷酸根基團,形成一個不穩(wěn)定的中間體。這個中間體隨即自行分解(二氧四節(jié)環(huán)斷裂),同時發(fā)射光子。
AMPPD在堿性條件下,被AP酶解生成相當穩(wěn)定的AMP-D陰離子,其有2~30min的分解半衰期,發(fā)出波長為470nm的持續(xù)性光,在15min時其強度達到高峰,15~60min內(nèi)光強度保持相對穩(wěn)定。
該試劑采用微粒子化學發(fā)光技術,采用最新磁性微粒,用以包被抗體。用堿性磷酸酶(ALP)標記抗原(抗體)。經(jīng)過普通抗原抗體反應,堿性磷酸酶結(jié)合在微粒子上,堿性磷酸酶的結(jié)合量同病人血清中的待測物質(zhì)成比例。經(jīng)過洗滌(反應管兩邊有磁場,磁性微粒包被的抗原抗體結(jié)合物被吸附在管子兩邊,其余游離部分被抽吸掉),最后加入發(fā)光底物DioxetanePhosphate,5分鐘后,儀器通過光電倍增管檢測反應的發(fā)光強度。
AMPPD是堿性磷酸酶的化學發(fā)光底物,在適宜的緩沖液中,隨著酶的催化水解作用,AMPPD分解成AMP-D,后者發(fā)出強度很高的光信號,其發(fā)光的速度取決于堿磷酶的濃度。當堿磷酶偶合到雜交的探針時,便可以通過此系統(tǒng)檢測到雜交分子的存在量。
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