吖啶酯DMAE-NHS的發(fā)光動力學,吖啶酯DMAE-NHS的發(fā)光為閃光,0.4s時發(fā)光強度達到zui大,前2s鐘內發(fā)光強度下降很快,此后下降比較慢,發(fā)光半衰期約為0.9s。DMAE-NHS的發(fā)光動力學性質不受DMAE-NHS濃度的影響,改變DMAE-NHS濃度只影響發(fā)光強度的大小,但不影響其達到zui大發(fā)光強度的時間和半衰期。
吖啶酯DMAE-NHS的發(fā)光強度DMAE-NHS的動力學檢測范圍為1.25×10-11~1.25x10-17mol,發(fā)光強度為6.11×1018cps/mol或1.03×107cps/ng。用DMAE-NHS標記TSH單克隆抗體,DMAE-NHS與Ab的分子比為2.4的情況下,實驗測得DMAE-NHS-Ab的發(fā)光強度為1.8×1019cps/molAb或1.125×105cps/ngAb。DMAE-NHS-Ab的動力學檢測范圍為1.0×10-12~1.0×10-18mol。
發(fā)光啟動試劑對DMAE-NHS發(fā)光強度的影響吖啶酯發(fā)光通常采用的發(fā)光啟動試劑有三種配方:二種物質的配方是H2O2和NaOH;三種物質的配方是HNO3(有些用HCL代替)、H2O2和NaOH;四種物質的配方為除上述三種物質外還加入一種表面活性劑。如CTAC、TritonX-100、Tween-20等以增強發(fā)光。
發(fā)光啟動試劑使用的HNO3,H2O2,和NaOH的濃度和體積不同,DMAE-NHS發(fā)光強度不同,采用如下組成時發(fā)光強度zui大,即(1)100μl0.1mol/LHNO3+0.1%H2O2(2)100μl0.25mol/LNaOH。
加入表面活性劑能增大DMAE-NHS的發(fā)光強度,試驗了三種表面活性劑∶CTAC,TritonX-100,Tween-20對DMAE-NHS的發(fā)光強度的影響,2%TritonX-100的增強的效果量好,
吖啶酯能使DMAE-NHIS的發(fā)光強度增大4.5倍,2%Tween-20和0.2%CTAC使DMAE-NHS的發(fā)光強度分別增大3.5和2.8倍。加入TritonX-100或Tween-20能增加DMAE-NHS的發(fā)光強度而不引起本底增加,但加入CTAC時引起本底增加很多,故不宜使用CTAC做增強劑。
吖啶酯DMAE-NHS的熱穩(wěn),定性DMAE-NHS的熱穩(wěn)定性隨pH值增大和溫度升高而降低,室溫(20℃)下,DMAE-NHS在pH為5.8,7.0,8.0的PB緩沖液中均較穩(wěn)定,16天后發(fā)光活性分別降低1.6%、3.6%和8.3%。37℃下,DMAE-NHS在pH為5.8,7.0,8.0的水溶液中,經過16天后的發(fā)光活性分別降低8.9%、22%和42%。
吖啶酯DMAE-NHS的水解性,DMAE-NHS在水溶液中的發(fā)光活性隨時間而降低的原因是因為發(fā)生水解,在堿性環(huán)境中有利于水解,升高溫度也有利于水解,即DMAE-NHIS的水解速度隨溶液pH值增大和溫度升高而加快。在4℃或冰凍條件下,DMAE-NHS在pH為7.0的0.1mol/L PB緩沖液中穩(wěn)定,保存半年后,其發(fā)光活性沒有下降。
吖啶酯DMAE-NHS的優(yōu)勢,吖啶酯DMAE-NHS與傳統(tǒng)吖啶酯相比,發(fā)光效率更高,熱穩(wěn)定性更好,親水性更強一些,該化學發(fā)光試劑光量子產率高、背景低,與蛋白、抗原,抗體等偶合后,發(fā)光效率幾乎不受影響,從而成為優(yōu)良的化學發(fā)光免疫分析標記試劑。
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