吖啶酯是一種靈敏度非常高的化學(xué)發(fā)光試劑,可用于腫瘤、細(xì)胞因子、抗原抗體等一些非常微量的物質(zhì)的檢測,自動化程度高,干擾背景小。不過有些人表示在使用吖啶酯時,不知道怎么去溶解,這里介紹如何溶解吖啶酯。
吖啶酯的溶解方法:吖啶酯通常是以凍干粉的形式低溫避光保存的,在使用時第一步就是將其配成溶液。吖啶酯在檢測過程中通常是直接標(biāo)記蛋白、抗體或核酸的,檢測環(huán)境一般為水溶液,所以一些吖啶酯都會增加一些抗水解與親水性的基團(tuán)。那么是不是就是用水來溶解吖啶酯呢?
答案是否定的,吖啶酯本身是非常容易水解的,尤其是含有NHS基團(tuán)的吖啶酯,對誰非常敏感。所以吖啶酯不可用水去溶解,需要用非質(zhì)子化溶劑,常用的溶劑比如DMF或者DMSO都是可以使用的。在后續(xù)的化學(xué)發(fā)光免疫反應(yīng)中,就可以在水溶液的環(huán)境中完成了。
吖啶酯上通常使用NHS標(biāo)記基團(tuán),可以直接與蛋白上的一級氨基相連接,同時脫去N-羥基琥珀酰亞胺。吖啶酯標(biāo)記完成后,與被標(biāo)記物之間以酰胺鍵或者酯鍵等形式存在,就可以穩(wěn)定存在于弱酸性緩沖中了,含有抗水解性基團(tuán)與親水基團(tuán)的還可以穩(wěn)定于中性水溶液。吖啶酯本身活性位點在堿性和氧化環(huán)境下不穩(wěn)定,偶聯(lián)后用弱酸性的緩沖液,鼓氮氣除去氧氣。
吖啶酯試劑有很多類型,目前德晟研發(fā)的有6中型號,為了保證吖啶酯的穩(wěn)定,都是以凍干粉的形式保存在冷凍柜。我們在使用的時候再拿出來,將吖啶酯溶解,配制成溶液,注意是現(xiàn)配現(xiàn)用,不要長時間保存。
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