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AMPPD的性質(zhì)、機(jī)理以及應(yīng)用范圍 ,3-(2'-螺旋金剛烷)-4-甲氧基-4-(3"-磷酰氧基)苯-1,2-二氧雜環(huán)丁烷(AMPPD),CAS號(hào)122341-56-4,分子式C18H23O7P,AMPPD為1,2-二氧環(huán)已烷衍生物,它是一種生物化學(xué)領(lǐng)域中超靈敏的堿性磷酸酶底物,其特點(diǎn):反應(yīng)速度快,在很短時(shí)間內(nèi)提供正確可靠的結(jié)果。在它的分子結(jié)構(gòu)中有兩個(gè)重要部分,一個(gè)是聯(lián)接苯環(huán)和金剛烷的二氧四節(jié)環(huán),它可以斷裂并發(fā)射光子;另一個(gè)是磷酸根基團(tuán),它維持著整個(gè)分子結(jié)構(gòu)的穩(wěn)定。在通常情況下,這種化合物很穩(wěn)定。但是,如果有堿性磷酸酶存在,磷酸二氧雜環(huán)丁烷作為酶的底物會(huì)在酶的催化一脫去磷酸根基團(tuán),形成一個(gè)不穩(wěn)定的中間體。這個(gè)中間體隨即自行分解(二氧四節(jié)環(huán)斷裂)。
AMPPD是堿性磷酸酶的化學(xué)發(fā)光底物,在適宜的緩沖溶液中,隨著酶的催化水解作用,AMPPD分解成AMP-D,后者發(fā)出強(qiáng)度很高的光信號(hào),其發(fā)光的速度取決于堿磷酶的濃度。當(dāng)堿磷酶偶合到雜交的探針時(shí),便可以通過(guò)此系統(tǒng)檢測(cè)到雜交分子的存在量。目前已廣泛用作化學(xué)發(fā)光免疫分析的發(fā)光底物,具有很高的檢測(cè)靈敏度、適用于檢測(cè)各種分子量的物質(zhì)、穩(wěn)定的發(fā)光底物、檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定、重復(fù)性好、檢測(cè)線性范圍寬、不需要特殊的發(fā)光底物-抗原/抗體連接物、方便,容易使用、可應(yīng)用多種分析模式(夾心、競(jìng)爭(zhēng)、抗體檢測(cè)等)等優(yōu)點(diǎn),已在醫(yī)學(xué)上推廣使用。但由于其價(jià)格較高,限制了其大規(guī)模的發(fā)展使用。價(jià)格高的主要原因是該物質(zhì)制備較為困難,合成工藝復(fù)雜。
AMPPD在堿性條件下,被AP酶解生成相當(dāng)穩(wěn)定的AMP-D陰離子,其有2~30min的分解半衰期,發(fā)出波長(zhǎng)為470nm的持續(xù)性光,在15min時(shí)其強(qiáng)度達(dá)到高峰,15~60min內(nèi)光強(qiáng)度保持相對(duì)穩(wěn)定。該試劑采用微粒子化學(xué)發(fā)光技術(shù),采用最新磁性微粒,用以包被抗體。用堿性磷酸酶(ALP)標(biāo)記抗原(抗體)。經(jīng)過(guò)普通抗原抗體反應(yīng),堿性磷酸酶結(jié)合在微粒子上,堿性磷酸酶的結(jié)合量同病人血清中的待測(cè)物質(zhì)成比例。經(jīng)過(guò)洗滌(反應(yīng)管兩邊有磁場(chǎng),磁性微粒包被的抗原抗體結(jié)合物被吸附在管子兩邊,其余游離部分被抽吸掉),最后加入發(fā)光底物DioxetanePhosphate,5分鐘后,儀器通過(guò)光電倍增管檢測(cè)反應(yīng)的發(fā)光強(qiáng)度。
目前我國(guó)市場(chǎng)上AMPPD很大一部分被國(guó)外品牌占據(jù),國(guó)內(nèi)有關(guān)于ANPPD的專利,但市場(chǎng)占據(jù)缺乏高質(zhì)量產(chǎn)品。蘇州亞科化學(xué)合成AMPPD具有自己的工藝路線,并打出自己的品牌Yacoo,在AMPPD市場(chǎng)上占據(jù)一定的份額。
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