吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析法是將具有高靈敏度的化學(xué)發(fā)光測(cè)定技術(shù)與高特異性的免疫反應(yīng)相結(jié)合,用于各種抗原、半抗原、抗體、激素、酶、脂肪酸、維生素和藥物等的檢測(cè)分析技術(shù)。應(yīng)用于臨床檢驗(yàn)的化學(xué)發(fā)光體系有多種,最主要的有魯米諾及其衍生物、吖啶酯、螺旋金剛烷-1,2-二氧乙烷及其衍生物和電化學(xué)發(fā)光體系等。
吖啶酯的發(fā)光原理:在堿性H2O2溶液中,吖啶酯的分子受到過氧化氫離子進(jìn)攻時(shí),吖啶環(huán)上的取代基能與吖啶環(huán)上的C-9和H2O2(過氧化氫)形成不穩(wěn)定的二氧乙烷,此二氧乙烷分解為CO2和電子激發(fā)態(tài)的N-甲基吖啶酮。吖啶酯或吖啶磺酰胺類化合物在有H2O2的稀堿性溶液中既能發(fā)光,不需要催化劑,發(fā)光系統(tǒng)簡(jiǎn)單。同時(shí)這類化合物的發(fā)光為閃光型,加入發(fā)光啟動(dòng)試劑后0.4s左右發(fā)射光強(qiáng)度即達(dá)到最大,半衰期為0.9s左右,非常省時(shí)?;谏鲜鎏攸c(diǎn),為增強(qiáng)吖啶酯或吖啶磺酰胺類化合物的化學(xué)發(fā)光強(qiáng)度,有些在發(fā)光啟動(dòng)試劑中加入Triton X-100、CTAC、Tween-20(吐溫-20)等表面活性劑。
相比魯米諾發(fā)光體系,吖啶酯類具有如下的優(yōu)點(diǎn):
1.吖啶酯化學(xué)發(fā)光為閃光型,在化學(xué)發(fā)光免疫分析領(lǐng)域與其它技術(shù)相比具有優(yōu)勢(shì),吖啶酯化學(xué)發(fā)光在加入啟動(dòng)劑0.4s后發(fā)射光強(qiáng)度達(dá)到最大,半衰期為0.9s,2s內(nèi)發(fā)光基本結(jié)束,可以實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè),
吖啶酯具有較高的量子產(chǎn)率,其化學(xué)發(fā)光效率較高,通常是魯米諾的五倍或五倍以上。
2.吖啶酯發(fā)光系統(tǒng)簡(jiǎn)單,不需要催化劑。在堿性條件下,吖啶酯分子受到過氧化氫攻擊可生成二氧乙烷,二氧乙烷不穩(wěn)定而分解為CO2和電子激發(fā)態(tài)的N-甲基吖啶酮,當(dāng)其回到基態(tài)時(shí)發(fā)出波長(zhǎng)為430nm的光,不需要催化劑,發(fā)光系統(tǒng)簡(jiǎn)單。
3.吖啶酯類化合物從發(fā)光的機(jī)理來說的特點(diǎn)是發(fā)光反應(yīng)中在形成電子激發(fā)態(tài)中間體之前,聯(lián)結(jié)于吖啶環(huán)上的不發(fā)光的取代基部分從吖啶環(huán)上脫離開來,即未發(fā)光部分與發(fā)光部分分離,因而其發(fā)光效率基本不受取代基結(jié)構(gòu)的影響。此外,吖啶酯分子量小,易與蛋白質(zhì)通過化學(xué)鍵牢固聯(lián)結(jié)(即為標(biāo)記),對(duì)聯(lián)結(jié)后的抗體構(gòu)象影響小(進(jìn)而保證了其在后續(xù)免疫檢測(cè)中保持良好的反應(yīng)性),且聯(lián)結(jié)物的穩(wěn)定性好。
在各個(gè)領(lǐng)域應(yīng)用方面,
吖啶酯發(fā)光免疫分析技術(shù)有著極大的幫助,根據(jù)雙抗體夾心法實(shí)驗(yàn)原理,利用吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫分析技術(shù)一結(jié)合生物素一親和素磁顆粒分離技術(shù),建立一種定量測(cè)定血清中癌胚抗原含量的檢測(cè)方法。由于應(yīng)用了吖啶酯化學(xué)發(fā)光法,測(cè)定血清中癌胚抗原的含量變得更加快速簡(jiǎn)便,使得患者能夠更及時(shí)的得到治療,讓醫(yī)學(xué)技術(shù)有了更大進(jìn)步。由于吖啶酯化學(xué)發(fā)光免疫技術(shù)是一種非常精確的定量檢測(cè),使檢測(cè)確率更高更快速方便,而一般免疫學(xué)檢測(cè)的準(zhǔn)確率明顯低于吖啶酯發(fā)光免疫技術(shù)的結(jié)果,且時(shí)間長(zhǎng),不方便。
總結(jié)以上,吖啶酯化學(xué)發(fā)光分析技術(shù)可以普遍推廣和進(jìn)行更深入的研究。