佰圣特分析
吖啶酯及吖淀酰胺類不同的特點(diǎn),這類化合物從發(fā)光的機(jī)理來說, 特點(diǎn)是: 發(fā)光反應(yīng)中在形成電子激發(fā)態(tài)中間體之前, 聯(lián)結(jié)于吖啶環(huán)上的不發(fā)光的取代基部分從吖啶環(huán)上脫離開來, 即未發(fā)光部分與發(fā)光部分分離, 因而其發(fā)光效率基本不受取代基結(jié)構(gòu)的影響。吖啶酯和吖啶酰胺在酸性溶液中(pH 小于4. 8) 都很穩(wěn)定, 該類化合物及其與蛋白的偶聯(lián)物在室溫下保存4 周, 其光量子產(chǎn)率不降低; 凍干品在- 20 ℃下, 可保存一年以上。但當(dāng)pH 大于4. 8(尤其是在堿性溶液中) ,吖啶酯和吖啶酰胺類化合物由于發(fā)生部分水解而降低其穩(wěn)定性, 水解機(jī)理。在水溶液中當(dāng)其受到OH- 進(jìn)攻時(shí)生成一假堿, 假堿繼續(xù)在OH- 作用下酯鍵斷裂, 最后生成N - 甲基吖啶酮, 水解過程為不發(fā)光的暗反應(yīng)過程。
吖啶類化合物在水溶液中的水解程度, 隨pH值增大而增大;隨溫度升高而增大。大多數(shù)吖啶酰胺類化合物的穩(wěn)定性較吖啶酯類高, 其原因是由于C - N 鍵與C - O 鍵的鍵級(jí)不同,C - N 鍵大于C- O 鍵; 吖啶酰胺類化合物抵抗水解的能力強(qiáng)于吖啶酯類。對(duì)于吖啶化合物來說, 吖啶環(huán)及酚環(huán)或苯磺酰環(huán)上, 不連取代基與連接不同取代基其穩(wěn)定性不同。通常吖啶環(huán)或酚環(huán)或苯磺酰環(huán)上,連有甲基等取代基的
吖啶酯或吖啶磺酰胺, 由于空間位阻大的原因熱穩(wěn)定性增加, 連有吸電子基團(tuán)時(shí), 因有利于親核取代反應(yīng)而使穩(wěn)定性降低。吖啶酯或吖啶磺酰胺類化合物化學(xué)發(fā)光不需要催化劑, 在有H2O2 的稀堿性溶液中即能發(fā)光,具有許多優(yōu)越性, 特別是無須一個(gè)催化過程, 也不需要增強(qiáng)劑, 從而降低了背景發(fā)光, 提高了信噪比, 干擾作用少。
該類化合物作為化學(xué)發(fā)光免疫分析的發(fā)光標(biāo)記物, 還具有其它方面的優(yōu)點(diǎn),如光釋放快速集中、發(fā)光效率高、發(fā)光強(qiáng)度大, 易于與蛋白質(zhì)聯(lián)結(jié)且聯(lián)結(jié)后光子產(chǎn)率不減少、標(biāo)記物穩(wěn)定, 在2 - 8 ℃下可保存數(shù)月之久, 因此吖啶酯或吖啶磺酰胺是一類非常有效的化學(xué)發(fā)光標(biāo)記物。這類化合物發(fā)光為閃光型, 加入發(fā)光啟動(dòng)試劑后,0. 4s 左右發(fā)射光強(qiáng)度達(dá)到最大, 半衰期為0. 9s 左右。吖啶酯或吖啶磺酰胺類化合物應(yīng)用于CLIA ,通常采用的體系是Acridinium ester/ H2O2 系統(tǒng), 即用
吖啶酯或吖啶磺酰胺標(biāo)記抗體或抗原, 用HNO3+ H2O2 和NaOH 作發(fā)光啟動(dòng)試劑。
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